點(diǎn)擊圖片查看大圖合成肽作為目前成本低抗原肽模擬技術(shù)已經(jīng)在免疫制備抗體行業(yè)廣泛被接受，大量被用于模擬制造識別大生物分子的抗體的基本原料,特別是在制備甲基化抗體,磷酸化抗體和糖基化抗體方面,這項(xiàng)技術(shù)具有不可比擬的優(yōu)勢.
由于它操作技術(shù)簡單,原材料成本低廉,生產(chǎn)周期較短以及人工場地要求簡單的特點(diǎn),被不少生物界同仁認(rèn)為是未來五年海外生產(chǎn)向中國制造轉(zhuǎn)移又一潛力產(chǎn)業(yè).在過去的幾年中，國內(nèi)已經(jīng)涌現(xiàn)出數(shù)十家進(jìn)行大規(guī)模定制抗體的生產(chǎn)企業(yè),主要集中在江浙滬一帶.
合成的多肽抗原由于分子較小,免疫到動物體內(nèi)后很難產(chǎn)生免疫應(yīng)急反應(yīng),因此在免疫前通常要偶聯(lián)一個載體蛋白.常用的載體蛋白有血藍(lán)蛋白(KLH),牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA).根據(jù)載體蛋白側(cè)鏈氨基與多肽抗原上偶聯(lián)位置的不同,我們定義為以下三種:N端氨基偶聯(lián),C端羧基偶聯(lián)和Cys巰基偶聯(lián).
偶連的方式與偶連的活化劑和氨基酸組成有關(guān)。
通常有下列三種方法供選擇：
1．EDC:通過C端羧基連接，一般要求序列中無Glu(E)，Asp (D)或一個酰胺化的C端
2．戊二醛通過N端的氨基偶連，要求序列中無Lys (K)或N端沒有被乙?；?/font>
3．MBS:通過Cys的巰基基團(tuán)與載體上的氨基連接.如果序列中無Cys，可添加Cys或Mpa，好增加在N端。
明皓生物提供以下藕連服務(wù)，分別用下列符號代表它們之間的組合：
MB01 BSA-Peptide N terminus
MB02C BSA-Peptide C terminus
MB02Cys BSA-Peptide Cys
MK01 KLH-Peptide N terminus
MK02C KLH-Peptide C terminus
MK02Cys KLH-Peptide Cys
MO11 OVA-Peptide N terminus
MO12C OVA-Peptide C terminus
MO13Cys OVA-Peptide Cys
偶聯(lián)好的載體復(fù)合物經(jīng)過透析,再加入佐劑和進(jìn)行乳化,就可以進(jìn)行免疫了.經(jīng)過一免,二免和增強(qiáng)免疫后,6-8周左右可以看到一個具有一般效價的制備多抗.這時候再通過取血,離心取上清的方法得到抗性血清.有條件的單位還通常會用標(biāo)準(zhǔn)蛋白Protein A/G進(jìn)行抗體純化,為了運(yùn)輸和儲存需要有時會進(jìn)行凍干處理.也有根據(jù)客戶的需要用免疫的抗原掛到親和層析柱上對抗體進(jìn)行純化,得到專一性更高的多抗體.
單抗的制備要稍微復(fù)雜一些,時間跨度會更長,一個項(xiàng)目結(jié)束下來要半年左右的時間.
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